【手性分析  3.】

（3. 手性分析的方法）

       手性分析的方法自从1848年巴斯德借助显微镜用摄子手工分离两种酒石酸晶体以来，手性分析出自不同的目的要求，衍生出众多分析方法。

       手性分析一般需要先分离后分析，分离就是将手性对映体先拆分，作为手性对映体的拆分手段有以下几类：①利用物理性质的差异，如溶解、吸附与扩散等；②利用反应速度差异的动力学拆分法；③利用酶的高度特异性的催化反应的酶拆分法；④利用某些特殊材料与其生成不同的包合物或衍生物的差异来拆分的方法；⑤利用特殊的膜材料来拆分的方法。

       现代分离分析的技术最简易的是结晶法；而最常见的、最有力的手段，首当推出色谱方法。色谱方法一般有以下几种： ①高效液相色谱（HPLC）；②气相色谱（GC）；③高效毛细管电泳（HPCE）；④超临界流体色谱（SFC）。这此分析手段各有千秋，均有不同的优缺点。以后将在具体的手性物分析中详细介绍哪种分析手段。

       而从分析过程和方式上讲对可分为直接法和间接法。

       ⑴直接法：在分子间引入手性环境，即采用手性的固定相或手性流动相直接分离分析药物对映体。一般可分为：①手性固定相法（CSP）：连接在固定相上的手性识别剂，与药物对映体反应形成非对映体复合物，然后作分离测定。分离的程度和洗脱顺序取决于复合物的相对强度。②手性流动相法（CMP）：向流动相中加入一手性试剂，它与溶质常以氢键、离子键或金属离子的配位键生成非对映体缔合物，从而以常规HPLC固定相分离。③手性检测器法（CD）：如与紫外或示差折光检测器联用，将所用的检测器前后再串联一个旋光检测器即可，使用双通道色谱数据处理机可同时得到两个检测器的结果，通过计算机将两个对映体浓度直接计算出来。适用于各类化合物，专属性好，无须与吸收波长相匹配，可以不须经手性分离，在手性药物的测定上具有很大的应用前景。

       ⑵间接法：即手性衍生化试剂法（CDR）：首先将对映体经手性试剂衍生，生成非对映异构体后，利用常规HPLC方法分离测定。

       适于下列情况的拆分：① 不宜直接拆分的化合物。添加某些基团，增加色谱系统选择性。如：手性脂肪胺类 ；② 提高紫外或荧光检测的效果。如：采用NBD-(L)-APY荧光试剂柱前衍生化测定布洛芬对映体，提高了检测灵敏度。

       特别说明：前已述及的杨季冬教授的团队在完成国家自然科学基金项目期间，所提出的“高选择性的手段+高灵敏度的检测方法”实现不经分离而直接同时测定手性对映体的方法，用的是超分子衍生反应生存非对映体，扩大差异，再用高灵敏度的共振瑞利散射分析方法（RRS）直接同时测定。因为没有用到色谱方法。其衍生化虽要归类为色谱的间接法，但聚最终检测用的是RRS方法，所以也可归类为直接测定法。

                                                                                丰都智愚河畔环境技术工作室