【手性分离技术  6.】

（6.  高效手性分离技术②）

色谱拆分法：

  与经典的对映体拆分法相比，色谱法具有许多明显的优越性，可以满足各种条件下对映体分离和测定的要求。能够进行简便快速的定性定量分析，也能进行制备规模的分离和微量测定。目前，色谱法已成为光学拆分最有用的方法。

       历史上，曾采用一些天然手性吸附剂，如淀粉、蔗糖、羊毛等成功拆分一些外消旋体。现代制备色谱在拆分外消旋体方面更是发挥更大的作用。如选用拆分能力很强的手性固定相填充剂，用大柱子，一次性能拆分几十克量的外消旋体，并达到99%的旋光纯度。

       原理：手性色谱的原理是通过待拆分对映体与手性固定相之间的可逆相互作用，根据形成缔合物的难易程度和稳定程度，经过多次质量交换后，达到对映体间的分离。手性拆分原理包括主-客体作用、络合作用、配体交换、相分离、离子交换等。核心是分子手性识别作用，即对映体与固定相间的相互作用。

       常用的色谱技术：气相高效液相色谱法（HPLC），气相色谱法（GC），薄层色谱法（TLC），逆流色谱—离心分配色谱法（DCCC）。在这些色谱技术方法中，高效液相色谱法不会因高温而使溶质构型发生变化和失去生物活性，柱容量高，具有发展成实验和工业规模对映体制备分离的巨大潜力。

       常用的色谱方法：手性试剂衍生化法（CDR）；手性流动相添加法（CMPA）；手性固定相法（CSP）。

       CDR法：以对映体与手性试剂于柱前衍生化，形成的共价结合非对映体对与固定相之间的键合力如偶极-偶极、电荷转移、氢键、疏水性不等，产生差速迁移而被分离。

  优点：可使用已有的非手性固定相，花费较少。选用具强烈发色团或荧光的手性试剂，可提高检测能力，可将手性消除和检测衍生反应结合起来。

  局限性：手性试剂需有高的光学纯度各对映体的衍生化速率和平衡常数应一致衍生化和色谱过程应不发生消旋化药物需有可衍生化的基团作制备用的手性衍生剂要求它的衍生化和去衍生化反应都容易进行，且总收率要高，生成的非对映体具有更大的分离性（有利于提高制备量）

  CMPA法：将手性试剂加到LC流动相中，与手性药物生成可逆的非对映体复合物，根据复合物的稳定性，在流动相中的溶解性和与固定相的键合力差异，于非手性固定相上分离对映体。

  优点：既不需要化学衍生，也不需要特殊的手性固定相。

  局限性：添加剂必须能提供有效的基团和位置以便与溶质对映体形成非对映的配合物，也必须具有合适的结构以改善分离性能和提高其立体选择性。

  流动相中手性试剂与对映体间的主要作用形式：超分子作用，络合作用，配体交换，离子相互作用等。核心是分子手性识别作用，即对映体与添加剂间的相互作用涉及到分子立体选择性。常见的手性添加剂：手性对离子添加剂、手性配位添加剂、环糊精等分子识别添加剂。

  手性固定相法（CSP）法：通过加入手性基体，利用“三点作用原理”，可直接与对映体作用生成稳定性不同的复合物，导致两对映体的色谱行为产生差异，从而达到分离的目的。

  手性固定相可以根据其化学类型分类为：①“刷型”手性固定相；②手性聚合物固定相；③环糊精类手性固定相；④大环抗生素手性固定相；⑤蛋白质手性固定相；⑥配体交换手性固定相；⑦冠醚手性固定相等。

 优点：柱效和柱容量高，不仅用于对映体分析，也可用于对映体制备分离。基于手性识别机理，可预测对映体洗脱顺序，确定其构型。

 局限性：被分离的溶质大部分需衍生以引入芳基等手性识别所需基团；多使用非极性溶剂作流动相，溶解度可能限制对某些溶质的应用。

                                                       丰都智愚河畔环境技术工作室